層析技術(shù)簡介

層析法是利用不同物質(zhì)理化性質(zhì)的差異而建立起來的技術(shù)。所有的層析系統(tǒng)都由兩個(gè)相組成：一是固定相，另一是流動(dòng)相。當(dāng)待分離的混合物隨流動(dòng)相通過固定相時(shí)。

由于各組分的理化性質(zhì)存在差異，與兩相發(fā)生相互作用（吸附、溶解、結(jié)合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量比）不同，且隨流動(dòng)相向前移動(dòng)，各組分不斷地在兩相中進(jìn)行再分配。分部收集流出液，可得到樣品中所含的各單一組分，從而達(dá)到將各組分分離的目的。 

 

而按層析原理還可將層析分為： 

1.  凝膠層析：又稱分子篩過濾或排阻層析等。醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理固定相是多孔凝膠，各組分的分子大小不同，因而在凝膠上受阻滯的程度也不同。

本法的優(yōu)點(diǎn)是所用凝膠屬于惰性載體，吸附力弱，操作條件溫和，不需要有機(jī)溶劑，對(duì)高分子物質(zhì)有很好的分離效果。常用的凝膠有Sephadex G系列。凝膠層析可用于脫鹽、分離提純、測定高分子物質(zhì)的分子量、高分子溶液的濃縮等。 

 

2.  離子交換層析：采用具有離子交換性能的物質(zhì)作固定相，利用它與流動(dòng)相中的離子能進(jìn)行可逆交換的性質(zhì)來分離離子型化合物的方法。主要用于分離氨基酸、多肽及蛋白質(zhì)，也可用于分離核酸、核苷酸及其他帶電荷的生物分子。 

 

3.  液相層析（HPLC）：在經(jīng)典液相層析法基礎(chǔ)上，引進(jìn)氣相層析的理論而發(fā)展起來的一項(xiàng)新穎快速的分離技術(shù)。

具有分離能力強(qiáng)、測定靈敏度高、可在室溫下進(jìn)行、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)分離蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、生物堿、類固醇和類脂等尤其有利，根據(jù)流動(dòng)相和固定相相對(duì)極性，液相色譜分析可分為正相和反相兩種。 

 

4.  親和層析：利用待分離物質(zhì)和它的特異性配體間具有特異的親和力，醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理從而達(dá)到分離的目的。將可親和的一對(duì)分子中的一方以共價(jià)鍵形式與不溶性載體相連作為固定相吸附劑，當(dāng)含混合組分的樣品通過此固定相時(shí)，只有和固定相分子有特異親和力的物質(zhì)，才能被固定相吸附結(jié)合，性無關(guān)組分隨流動(dòng)相流出。

改變流動(dòng)相組分，可將結(jié)合的親和物洗脫下來。親和層析中所用的載體稱為基質(zhì)，與基質(zhì)共價(jià)連接的化合物稱配基。

具有專一親和力的生物分子對(duì)主要有：抗原與抗體，DNA與互補(bǔ)DNA或RNA，酶與底物、激素與受體、維生素與特異結(jié)合蛋白、糖蛋白與植物凝集素等。親和層析可用于純化生物大分子、稀釋液的濃縮、不穩(wěn)定蛋白質(zhì)的貯藏、分離核酸等。